Nature.com сайтына кергәнегез өчен рәхмәт.Сез кулланган браузер версиясенең CSS ярдәме чикләнгән.Иң яхшы тәҗрибә өчен без яңартылган браузерны кулланырга киңәш итәбез (яки Internet Explorer'та туры килү режимын сүндерегез).Шул ук вакытта, дәвамлы ярдәмне тәэмин итү өчен, без сайтны стильләр һәм JavaScriptсыз күрсәтәчәкбез.
Pulпкә кистик фиброзын дәвалау өчен ген векторлары үткәргеч һава юлларына юнәлтелергә тиеш, чөнки үпкәләрнең периферик транскодукциясе терапевтик эффектка ия ​​түгел.Вируслы үткәрүнең эффективлыгы турыдан-туры йөртүченең яшәү вакыты белән бәйле.Ләкин, ген йөртүчеләр кебек җибәрү сыеклыклары сигнализация вакытында альвеолларга таралалар, һәм теләсә нинди формадагы терапевтик кисәкчәләр тиз арада мококилиар транспорт белән чыгарыла.Ген йөртүчеләрнең сулыш юлларында яшәү вакытын озайту мөһим, ләкин ирешү авыр.Сулыш юллары өслегенә юнәлтелгән ташучы-коньигуацияләнгән магнит кисәкчәләре региональ адреслауны яхшырта ала.Vivo тасвирлау проблемалары аркасында, мондый магнит кисәкчәләренең һава өслегендә кулланылган магнит кыры булган тәртибе начар аңлашыла.Бу тикшерүнең максаты - синхротрон тасвирламасын куллану, вивода бер һәм күпчелек кисәкчәләрнең динамикасын һәм үрнәкләрен өйрәнү өчен, наркозланган тычкан трахеясында магнит кисәкчәләренең хәрәкәтен визуальләштерү.Аннары без шулай ук ​​магнит кыры булганда лентивираль магнит кисәкчәләрен китерү тычкан трахеясында трансдуктивлык эффективлыгын арттырырмы дип бәяләдек.Синхротрон рентген тасвирламасы магнит кисәкчәләренең стационар һәм хәрәкәт итүче магнит кырларында витрода һәм вивода күрсәтә.Кисәкчәләрне магнит ярдәмендә тере һава юллары өстенә җиңел генә тартып алып булмый, ләкин транспорт вакытында чыганаклар магнит кыры иң көчле булган күренеш өлкәсендә тупланган.Лентивираль магнит кисәкчәләре магнит кыры булганда китерелгәндә, үткәрү эффективлыгы алты тапкыр артты.Бергә тупланган бу нәтиҗәләр шуны күрсәтә: лентивираль магнит кисәкчәләре һәм магнит кырлары виводагы үткәргеч һава юлларында ген векторын адреслау һәм трансдуктив дәрәҗәләрен яхшырту өчен кыйммәтле алым булырга мөмкин.
Кистик фиброз (CF) CF трансмембрана үткәрү көйләүчесе (CFTR) дип аталган бер гендагы үзгәрешләр аркасында килеп чыга.CFTR протеины - ион каналы, ул организмның күп эпителий күзәнәкләрендә, шул исәптән һава юлларында, кистик фиброз патогенезында төп урын.CFTRдагы җитешсезлекләр су транспортының аномаль булуына, һава өслегенең дегидрацияләнүенә, һава юлының сыеклык катламының (ASL) кимүенә китерә.Бу шулай ук ​​былжыр транспорт (MCT) системасының сулыш кисәкчәләрен һәм патогеннарын чистарту сәләтенә комачаулый.Максатыбыз - CFTR генның дөрес күчермәсен китерү һәм ASL, MCT, үпкә сәламәтлеген яхшырту өчен лентивираль (LV) ген терапиясен эшләү, һәм vivo1'да бу параметрларны үлчәя торган яңа технологияләр эшләүне дәвам итү.
ЛВ векторлары - кистик фиброз ген терапиясенә алдынгы кандидатларның берсе, чөнки алар терапевтик генны һава базаль күзәнәкләренә (һава юллары тамыр күзәнәкләре) мәңгегә берләштерә алалар.Бу бик мөһим, чөнки алар кистик фиброз белән бәйле функциональ ген коррекцияләнгән һава юл күзәнәкләренә дифференциацияләп нормаль гидратлашуны һәм былжырны чистартуны торгыза алалар, нәтиҗәдә гомерлек файда китерәләр.ЛВ векторлары үткәргеч һава юлларына каршы юнәлтелергә тиеш, чөнки монда үпкә CF белән башлана.Векторны үпкәгә тирәнрәк китерү альвеолар трансдукциягә китерергә мөмкин, ләкин бу кистик фиброзда терапевтик эффект юк.Ләкин, ген йөртүчеләр кебек сыеклыклар табигый рәвештә альвеолларга күченәләр, бала тугач 3,4 һәм терапевтик кисәкчәләр тиз арада МКТлар авыз куышына чыгарыла.LV трансдуктивлыгының эффективлыгы турыдан-туры векторның кәрәзле күзәнәкләргә якынлашу вакыты белән турыдан-туры бәйле - “яшәү вакыты” 5, ул гадәти региональ һава агымы белән кыскартыла, шулай ук ​​былжыр һәм MCT кисәкчәләренең координацияләнгән күтәрелеше.Кистик фиброз өчен, һава юлларында LV яшәү вакытын озайту сәләте бу өлкәдә югары трансдуктивлыкка ирешү өчен мөһим, ләкин әлегә кадәр авыр.
Бу каршылыкны җиңәр өчен, без LV магнит кисәкчәләре (MP) ике өстәмә ысул белән булыша ала.Беренчедән, алар магнит белән һава өслегенә юнәлтелергә мөмкин, максатчанлыкны яхшырту һәм ген йөртүче кисәкчәләрен һава юлының дөрес өлкәсендә булырга ярдәм итү;һәм ASL) күзәнәк катламына күчәләр. Депутатлар антителәләр, химиотерапия препаратлары яки күзәнәк мембраналарына бәйләнгән яки тиешле күзәнәк өслеге рецепторларына бәйләнгән һәм шеш урыннарында тупланган наркотиклар җибәрү өчен киң кулланыла. статик электр барлыгы.Яман шеш терапиясе өчен магнит кырлары 7. Башка "гипертермик" ысуллар осылучы магнит кырларына эләккәндә депутатларны җылытып шеш күзәнәкләрен үтерүгә юнәлтелгән.Магнит трансфекциясе принцибы, анда магнит кыры ДНКның күзәнәкләргә күчүен көчәйтү өчен трансфекция агенты буларак кулланыла, гадәттә витрода вирус булмаган һәм вируслы ген векторларын кулланып, күзәнәк линияләрен куллану авыр. ..LV магнитотрансфекциянең эффективлыгы, LV MP витрода кеше бронхиаль эпителийының күзәнәк сызыгына статик магнит кыры булганда, LV векторы белән чагыштырганда 186 тапкыр арттыру эффективлыгы билгеләнде.LV MT шулай ук ​​кистик фиброзның витро моделендә кулланылган, монда магнит трансфекциясе һава-сыек интерфейс культураларында LV транскодукциясен кистик фиброз балыгы булганда 20 факторга арттырган.Ләкин, виво органында магнитотрансфекция чагыштырмача аз игътибар алды һәм берничә хайван тикшеренүләрендә бәяләнде11,12,13,14,15, аеруча үпкәләрдә 16,17.Ләкин, кистик фиброзда үпкә терапиясендә магнит трансфекция мөмкинлекләре ачык.Тан һ.б..
Сулыш юллары өслегендә кечкенә магнит кисәкчәләренең кулланылган магнит кыры булган тәртибен күз алдына китерү һәм өйрәнү кыен, шуңа күрә алар начар аңлашыла.Башка тикшеренүләрдә без синхротрон пропагандалау фазасы контраст рентген күзаллау (PB-PCXI) ысулын эшләдек, инвазив булмаган сурәтләү һәм ASL18 тирәнлегендә һәм MCT19 тәртибендә минут үзгәрү өчен, 20 газ каналының өслеген гидратлаштыруны үлчәү өчен. һәм эре күрсәткеч дәвалау эффективлыгы буларак кулланыла.Моннан тыш, безнең MCT балллау ысулы алумина яки югары реактив индекс пыяладан торган 10–35 мм диаметрлы кисәкчәләрне PB-PCXI21 белән күренгән MCT маркерлары итеп куллана.Ике ысул да кисәкчәләр төрен, шул исәптән депутатларны сурәтләү өчен яраклы.
Atгары киңлек һәм вакытлы резолюция аркасында, безнең PB-PCXI нигезендә ASL һәм MCT анализлары MP ген тапшыру ысулларын аңларга һәм оптимальләштерергә ярдәм итәр өчен виводагы бер һәм күп кисәкчәләрнең динамикасын һәм тәртип үрнәкләрен өйрәнү өчен бик яраклы.Без монда кулланган алым SPring-8 BL20B2 нур сызыгын кулланып, безнең гетероген ген экспрессия формаларын аңлатырга ярдәм итәр өчен, тычканнарның борын һәм үпкә һава юлларына думи векторы китерелгәннән соң сыеклык хәрәкәтен күз алдына китердек. безнең генда.3.4 йөртүче дозасы белән хайваннарны өйрәнү.
Бу тикшерүнең максаты - PB-PCXI синхротронын куллану, тере тычкан трахеясында берничә депутатның виво хәрәкәтен күз алдына китерү.Бу PB-PCXI сурәтләү тикшеренүләре MP сериясен, магнит кырының көчен, MP хәрәкәтенә тәэсирен ачыклау өчен эшләнгән.Тышкы магнит кыры китерелгән MF калырга яки максатчан өлкәгә күченергә ярдәм итәр дип уйладык.Бу тикшеренүләр шулай ук ​​трахеяда калган кисәкчәләр күләмен максимумлаштыручы магнит конфигурацияләрен билгеләргә мөмкинлек бирде.Икенче тикшеренүләр сериясендә без бу оптималь конфигурацияне LV-MP-ны тычкан һава юлларына виво китереп чыгару нәтиҗәсендә трансдуктивлык үрнәген күрсәтү өчен кулландык, LV-MP-ларны һава юлларын адреслау контекстында китерү нәтиҗәсендә. LV трансдуктив эффективлыгын арттыруда..
Барлык хайваннарны өйрәнү Аделаида Университеты (M-2019-060 һәм M-2020-022) һәм SPring-8 Синхротрон Хайваннар Этикасы Комитеты раслаган протоколлар нигезендә үткәрелде.Тикшеренүләр ARRIVE тәкъдимнәре нигезендә үткәрелде.
Барлык рентген рәсемнәр дә Япониянең SPring-8 синхротронындагы BL20XU нурында алдан әйтелгәнгә охшаган көйләү ярдәмендә алынган.Кыскасы, эксперимент тартмасы синхротрон саклагыч боҗрасыннан 245 м ераклыкта урнашкан.-6рнәк-детектор аралыгы 0,6 м кисәкчәләрне сурәтләү өчен, фаза контраст эффектларын булдыру өчен 0,3 м виво тасвирлау тикшеренүләре өчен кулланыла.25 кВ энергиясе булган монохроматик нур кулланылды.Рәсемнәр sCMOS детекторына кушылган югары резолюцияле рентген трансдуктер (SPring-8 BM3) ярдәмендә алынган.Трансдуктор рентген нурларын 10 мм калынлыктагы ссинтилатор (Gd3Al2Ga3O12) ярдәмендә күренеп торган яктылыкка әйләндерә, аннары × 10 (NA 0.3) микроскоп максаты ярдәмендә sCMOS сенсорына юнәлтелә.SCMOS детекторы 2048 × 2048 пиксель һәм чимал пиксель зурлыгы 6,5 × 6,5 мм булган Orca-Flash4.0 (Хамаматсу Фотоника, Япония) иде.Бу көйләү 0,51 мм эффектив изотроп пиксель һәм якынча 1,1 мм × 1,1 мм күренеш кырын бирә.Экспозициянең озынлыгы 100 мс, сулыш юллары эчендә һәм тышында магнит кисәкчәләренең сигнал-шу коэффициентын максимальләштерү өчен сайланган, сулыш аркасында килеп чыккан хәрәкәт экспонатларын минимальләштергәндә.Vivo тикшеренүләре өчен, рентген нурларын чикләү өчен, рентген юлына тиз рентген ябыштыргыч урнаштырылды.
LV медиа SPring-8 PB-PCXI сурәтләү тикшеренүләрендә кулланылмады, чөнки BL20XU сурәтләү камерасы Biosafety Level 2 сертификаты түгел.Моның урынына, без ике коммерция сатучыдан яхшы характерлы депутатлар сайлап алдык, алар зурлыкларны, материалларны, тимер концентрацияләрен һәм кушымталарны үз эченә ала, - башта магнит кырларының пыяла капиллярларда депутатлар хәрәкәтенә ничек тәэсир итүен аңлау өчен. тере һава юллары.өслеге.Депутатның зурлыгы 0,25-18 мм арасында үзгәрә һәм төрле материаллардан ясала (таблицаны карагыз), ләкин һәр үрнәкнең составы, шул исәптән депутаттагы магнит кисәкчәләренең зурлыгы, билгеле түгел.19, 20, 21, 23, 24 киң колачлы MCT тикшеренүләребезгә нигезләнеп, без трахеаль һава юлында 5 мм га кадәр депутатларны күрербез дип көтәбез, мәсәлән, MP хәрәкәтенең яхшырак күренүен күрү өчен эзлекле рамнарны чыгарып.0,25 мм булган бер MP сүрәтләү җайланмасы резолюциясеннән кечерәк, ләкин PB-PCXI аларның күләмле контрастын һәм алар урнаштырылганнан соң салынган өслек сыеклыгының хәрәкәтен ачыклар дип көтелә.
Таблицада һәр депутат өчен үрнәкләр.1 20 μл пыяла капиллярларда (Drummond Microcaps, PA, АКШ) эчке диаметры 0,63 мм булган.Корпускуляр кисәкчәләр суда, ә CombiMag кисәкчәләре җитештерүченең сыеклыгында бар.Eachәр труба ярты сыеклык белән тутырылган (якынча 11 µл) һәм үрнәк тоткычка урнаштырыла (1 нче рәсемне кара).Пыяла капиллярлар сәхнәгә горизонталь рәвештә сурәтләү камерасында урнаштырылды һәм сыеклык читенә урнаштырылды.19 мм диаметрлы (28 мм озынлыктагы) никель-кабык магнит сирәк җирдән, неодий, тимер һәм бордан (NdFeB) (N35, мәче. LM1652, Jaycar Electronics, Австралия) 1,17 Т реманты белән бәйләнгән. ирешү өчен аерым тапшыру таблицасы күрсәтү вакытында позициягезне ерактан үзгәртү.Рентген тасвирлау магнит үрнәктән якынча 30 мм урнашканда һәм рәсемнәр секундына 4 кадрда алынганнан башлана.Тасвирлау вакытында магнит пыяла капилляр трубасына якын китерелде (якынча 1 мм ераклыкта), аннары кыр көче һәм позициянең эффектын бәяләү өчен труба буйлап күчтеләр.
Xy үрнәген тәрҗемә итү этабында пыяла капиллярларда MP үрнәкләрен үз эченә алган витро сурәтләү көйләнеше.Рентген нуры юлы кызыл нокталы сызык белән билгеләнгән.
Депутатларның витро күренеше булдырылганнан соң, аларның бер өлеше кыргый типтагы хатын-кыз Вистар альбино тычканнарында (weeks 12 атна, ~ 200 г) сыналды.Медетомидин 0,24 мг / кг (Домитор®, Зеноак, Япония), мидазолам 3,2 мг / кг (Dormicum®, Astellas Pharma, Япония) һәм буторфанол 4 мг / кг (Веторфале®, Мейджи Сейка).Кычытканнар Фарма (Япония) катнашмасы белән антезацияләнде, интерперитон инъекциясе белән.Анестезиядән соң, алар трахея тирәсендәге мехны чыгарып, эндотрахеаль труба (ET; 16 Га венага кертелгән каннула, Терумо БКТ) кертеп, җылылык капчыгы булган махсус ясалган тәлинкәдә супин позициясендә имобилизацияләү өчен әзерләнделәр. тән температурасын сакларга.22. Аннары сурәтләү тәлинкәсе трахеяны рентген рәсеменә горизонталь рәвештә тигезләү өчен, рәсем тартмасындагы үрнәк этапка 2а рәсемдә күрсәтелгәнчә беркетелде.
а) SPring-8 сүрәтләү берәмлегендә виво тасвирлама урнаштыру, рентген нур юлы кызыл нокталы сызык белән билгеләнгән.(б, в) Трахеаль магнит локализациясе ике ортогональ урнаштырылган IP камера ярдәмендә ерактан башкарылды.Экрандагы рәсемнең сул ягында, сез башны тотып торган чыбык әйләнәсен һәм ET трубасы эчендә урнаштырылган каннуланы күрә аласыз.
100 Га пыяла шприц кулланып, ерактан идарә ителгән шприц насос системасы (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 30 Га энә ярдәмендә PE10 торбасына (0,61 мм ОД, 0,28 мм ID) тоташтырылган.Эндотрахеаль трубаны салганда очның трахеяда дөрес торышын тикшерү өчен трубканы билгеләргә.Микропум кулланып, шприц плунгеры алынды һәм трубаның очын китереп чыгару өчен MP үрнәгенә чумдылар.Аннары йөкләнгән тапшыру трубасы эндотрахеаль трубага кертелде, очын көтелгән кулланылган магнит кырының иң көчле өлешенә урнаштырды.Рәсем алу безнең Arduino нигезендәге вакыт тартмасына тоташтырылган сулыш детекторы ярдәмендә контрольдә тотылды, һәм барлык сигналлар (мәсәлән, температура, сулыш алу, ябык ябык, һәм рәсем алу) Powerlab һәм LabChart (AD Instruments, Сидней, Австралия) ярдәмендә яздырылды. 22 Тасвирлама Торак булмаганда, ике IP камера (Panasonic BB-SC382) бер-берсенә якынча 90 ° урнашкан һәм магнитның трахеяга карата торышын контрольдә тоту өчен кулланылган (2б рәсем, с).Хәрәкәт экспонатларын киметү өчен, терминалның сулыш агымы платформасы вакытында сулышка бер рәсем алынган.
Магнит икенче этапка тоташтырылган, ул тасвирлау тәненең читендә ерак урнашырга мөмкин.Магнитның төрле позицияләре һәм конфигурацияләре сынадылар, шул исәптән: трахеядан якынча 30 ° почмакта урнаштырылган (конфигурацияләр 2а һәм 3а рәсемнәрдә күрсәтелгән);бер магнит хайван өстендә, икенчесе аста, тарту өчен баганалар куелган (3б рәсем)., хайван өстендә бер магнит, аста - баганалар репрессия өчен куелган (3с рәсем), һәм өстендә бер магнит һәм трахеяга перпендикуляр (3d рәсем).Хайванны һәм магнитны урнаштырганнан соң һәм MPны шприц насосына йөкләгәннән соң, рәсемнәр алганнан соң 4 µл / сек тизлектә 50 µл дозасын китерегез.Аннары магнит рәсемнәр алуны дәвам иткәндә трахея буйлап яки артка күчерелә.
Виво тасвирлау өчен магнит конфигурациясе (а) трахея өстендә якынча 30 ° почмакта, б) тарту өчен конфигурацияләнгән ике магнит, в) тарту өчен конфигурацияләнгән ике магнит, г) өстә бер магнит һәм перпендикуляр трахея.Күзәтүче трахея аша авыздан үпкәгә карады һәм рентген нуры тычканның сул ягыннан үтеп, уң ягыннан чыкты.Магнит һава юлының озынлыгы яисә сул һәм уң трахея өстендә рентген нуры юнәлешендә хәрәкәтләнә.
Без шулай ук ​​сулыш һәм йөрәк тибеше катнашмаган очракта һава юлларында кисәкчәләрнең күренүен һәм тәртибен ачыкларга тырыштык.Шуңа күрә, сурәтләү периоды ахырында, пентобарбиталь доза аркасында хайваннар кешелектән эйтанлаштылар (Сомнопентил, Питман-Мур, Вашингтон Кросс, АКШ; ~ 65 мг / кг ip).Кайбер хайваннар сурәтләү платформасында калдылар, һәм сулыш һәм йөрәк тибешен туктатканнан соң, сурәтләү процессы кабатланды, һава юлында бернинди MP күренмәсә, өстәмә доза өстәде.
Нәтиҗә ясалган рәсемнәр яссы һәм караңгы кыр өчен төзәтелде, аннары кинога җыелдылар (секундына 20 кадр; сулыш тизлегенә карап 15-25 × нормаль тизлек) MATLAB (R2020a, The Mathworks) язылган махсус сценарий ярдәмендә.
LV ген векторын тапшыру буенча барлык тикшеренүләр Аделаида Университеты Лаборатория Хайваннарны Тикшерү Centerзәгендә үткәрелде һәм SPring-8 эксперименты нәтиҗәләрен магнит кыры булганда LV-MP тапшыру вивода ген тапшыруны көчәйтә аламы-юкмы икәнлеген бәяләү өчен кулланылды. .MF һәм магнит кырының эффектларын бәяләү өчен, ике төркем хайваннар эшкәртелде: бер төркемгә LV MF белән магнит урнаштыру, икенче төркем LV MF белән контроль төркем белән магнитсыз укол салдылар.
LV ген векторлары алдан тасвирланган 25, 26 ысуллар ярдәмендә ясалган.LacZ векторы MPSV конструктив промоутеры (LV-LacZ) белән идарә ителгән атом локальләштерелгән бета-галактозида генын белдерә, үпкә тукымасының фронтларында һәм бүлекләрендә күренгән трансдуктив күзәнәкләрдә зәңгәр реакция продукты җитештерә.Титрация күзәнәк культураларында LUZ-позитив күзәнәкләр санын кул белән санап, гемоцитометр ярдәмендә TU / млда титерны исәпләү өчен башкарылды.Оештыручылар -80 ° C температурада сакланганнар, кулланганчы эретелгәннәр, һәм CombiMag белән 1: 1 кушып, бозга инкубацияләп, ким дигәндә 30 минут кала.
Нормаль Спрага Давли тычканнары (n = 3 / төркем, 0,4мг / кг медетомидин (Домитор, Илиум, Австралия) һәм 60мг / кг кетамин (Илиум, Австралия) катнашмасы белән an 2-3 наркозланган ip) ip ) 16 Га вируслы каннула белән инъекция һәм хирургик булмаган авыз каннуляциясе.Трахеаль һава юллары тукымасының LV трансдуктивлыгын алуын тәэмин итү өчен, ул безнең алда тасвирланган механик пертбуртация протоколы ярдәмендә шартланган, анда трахеаль һава юлы чыбык кәрзин белән охшаган (N-түгәрәк, NTSE-022115 очсыз нитинол таш экстракторы) -UDH, Кук Медицина, АКШ) 30 б28.Аннары, биосефетика кабинетындагы пертурбациядән соң 10 минут чамасы вакыт узгач, LV-MP трахеаль администрациясе башкарылды.
Бу экспериментта кулланылган магнит кыры виво рентген тикшерүенә охшаш конфигурацияләнде, шул ук магнитлар трахея өстендә дистилляция стент кыскычлары белән тотылды (4 нче рәсем).LV-MPның 50 µл күләме (2 х 25 µл аликот) трахеяга (n = 3 хайван) алда әйтелгәнчә гельле пипетка ярдәмендә китерелгән.Контроль төркем (n = 3 хайван) бер үк LV-MP магнит кулланмыйча алды.Инфузия беткәч, каннула эндотрахеаль трубадан чыгарыла һәм хайван сузыла.Магнит чыгарылганчы 10 минут урында тора.Кычытканнар мелоксикам (1 мл / кг) (Илиум, Австралия) белән тере рәвештә дозаланганнар, аннары анипезия алу, 1 мг / кг атипамазол гидрохлорид (Антиседан, Зоетис, Австралия).Кычытканнар җылы сакланганнар һәм анестезиядән тулысынча торгызылганчы күзәтелгәннәр.
Биологик куркынычсызлык шкафында LV-MP тапшыру җайланмасы.Күрәсез, ET трубасының ачык соры Луер-йозак җиңе авыздан чыга, һәм рәсемдә күрсәтелгән гель пипетка очлары ET трубасы аша трахеяга кирәкле тирәнлеккә кертелә.
LV-MP идарә итү процедурасыннан соң бер атна үткәч, хайваннар 100% CO2 ингаляциясе белән кеше корбаннары китерделәр һәм LacZ экспрессиясе безнең стандарт X-гал дәвалау ярдәмендә бәяләнде.Андотрахеаль трубаны урнаштыру аркасында механик зыян яки сыеклыкның саклануы анализга кертелмәсен өчен, иң каудаль кычыткан боҗралары алынды.Анализ өчен ике ярты алу өчен һәр трахея озынлыкта киселде һәм луминаль өслекне күз алдына китерү өчен Minutien энә (Сынлы фән кораллары) ярдәмендә силикон каучук (Силгард, Dow Inc) булган касәгә урнаштырылды.Күчерелгән күзәнәкләрнең таралуы һәм характеры фронталь фотография белән Nikon микроскопы (SMZ1500) DigiLite камерасы һәм TCapture программа тәэминаты (Tucsen Photonics, Китай) ярдәмендә расланды.Рәсемнәр 20х зурайтуда алынган (трахеяның тулы киңлеге өчен максималь көйләнүне дә кертеп), трахеяның бөтен озынлыгы адым саен күрсәтелә, рәсемнәр "тегелгән" булсын өчен, һәр рәсем арасында җитәрлек охшашлык тәэмин ителә.Аннары һәр трахеядан алынган рәсемнәр планета хәрәкәт алгоритмы ярдәмендә 2.0.3 (Microsoft Research) версиясен кулланып, бер композицион рәсемгә берләштерелде. Animalәрбер хайваннан трахеаль композицион рәсемнәр эчендә LacZ экспрессиясе мәйданы алдан тасвирланганча автоматлаштырылган MATLAB скрипты ярдәмендә бәяләнде28, 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, and Value <0.7. Animalәрбер хайваннан трахеаль композицион рәсемнәр эчендә LacZ экспрессиясе мәйданы алдан тасвирланганча автоматлаштырылган MATLAB скрипты ярдәмендә бәяләнде28, 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, and Value <0.7. Площадь Кресрессии LacZ в соверных изображениях трахеи от каждого животного б кон количественно определена с использованием авататизированного черма МАТЛАБ (R2020a, MathWorks), как описов. , 7. Animalәрбер хайваннан композицион трахеаль рәсемнәрдә LacZ экспрессиясенең мәйданы автоматлаштырылган MATLAB скрипты ярдәмендә бәяләнде (R2020a, MathWorks), алдан әйтелгәнчә, 0.35 көйләүләрен кулланып.0,15 һәм кыйммәт <0 .7.如前所述 ， 使用 AT MATLAB 脚本 20 R2020a ， MathWorksMat 前所 述 自动 自动 自动 Матлаб 脚本 20 202020a ath Математика） 来自 每 只 使用 使用 使用 使用 35 使用 35 0.35 <色调 <0.58 、> 0.15 和 值 <0.7 的 。。。。。 IP ХИП Области косрессии LacZ на соверных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием авататизированного черекима MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано роте . Animalәрбер хайван трахеясенең композицион рәсемнәрендә LacZ экспрессия өлкәләре автоматлаштырылган MATLAB скрипты (R2020a, MathWorks) ярдәмендә бәяләнде, алда әйтелгәнчә 0,35 <hue <0.58, туендыру> 0,15 һәм кыйммәт <0.7.GIMP v2.10.24 тукымалар контурларын күзәтеп, тукымалар өлкәсен ачыклау һәм трахеаль тукымалардан читтә ялган ачыклау өчен, һәр составлы рәсем өчен маска кул белән ясалган.Animalәрбер хайваннан барлык составлы рәсемнәрдән тапланган урыннар шул хайван өчен бөтен тапланган мәйданны бирү өчен җыелдылар.Аннары буялган мәйдан нормальләштерелгән мәйдан алу өчен битлекнең гомуми мәйданы буенча бүленде.
Eachәр трахея парафинга салынган һәм 5 мм калынлыкта киселгән.Секцияләр нейтраль тиз кызыл белән 5 минутка каршы тордылар һәм рәсемнәр Nikon Eclipse E400 микроскопы, DS-Fi3 камерасы һәм NIS элементын алу программасы (5.20.00 версия) ярдәмендә алынды.
Барлык статистик анализлар да GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) башкарылды.Статистик әһәмият p ≤ 0.05 итеп куелган.Нормальлек Шапиро-Уилк тесты ярдәмендә сынады һәм LacZ буяудагы аермалар яраксыз т-тест ярдәмендә бәяләнде.
1-нче таблицада сурәтләнгән алты депутат PCXI тарафыннан тикшерелде, һәм күренүчәнлек 2-нче таблицада сурәтләнде. Ике полистирол депутаты (MP1 һәм MP2; 18 µm һәм 0,25 µm) PCXI тарафыннан күренмәде, калган үрнәкләрне ачыкларга мөмкин иде. (мисаллар 5 нче рәсемдә күрсәтелгән).MP3 һәм MP4 зәгыйфь күренәләр (10-15% Fe3O4; тиешенчә 0,25 мм һәм 0,9 мм).MP5 (98% Fe3O4; 0,25 мм) сынап каралган иң кечкенә кисәкчәләр булса да, ул иң ачык күренде.CombiMag MP6 продуктын аеру кыен.Барлык очракларда да МФны табу сәләтебез магнитны капиллярга параллель артка һәм артка күчереп бик яхшырды.Магнитлар капиллярдан ераклашканда, кисәкчәләр озын чылбырларда тартылды, ләкин магнитлар якынлашканда һәм магнит кыры көче артканда, кисәкчәләр чылбырлары капиллярның өске өслегенә күчкәндә кыскартылды (өстәмә видео S1 карагыз) : MP4), өслектә кисәкчәләр тыгызлыгын арттыру.Киресенчә, магнит капиллярдан алынгач, кыр көче кими һәм депутатлар капиллярның өске өслегеннән сузылган озын чылбырларга үзгәрәләр (өстәмә видео S2: MP4 карагыз).Магнит хәрәкәтне туктаткач, кисәкчәләр тигезлек торышына җиткәч берникадәр вакыт хәрәкәт итүләрен дәвам итәләр.Депутат капиллярның өске өслегенә таба һәм ераклашканда, магнит кисәкчәләре чүп-чарны сыеклык аша тарта.
PCXI астында MP-ның күренеше үрнәкләр арасында шактый үзгәрә.а) MP3, б) MP4, в) MP5 һәм г) MP6.Монда күрсәтелгән барлык рәсемнәр капиллярдан якынча 10 мм урнашкан магнит белән алынган.Күренгән зур түгәрәкләр - капиллярларда капланган һава күбекләре, фаза контраст образының кара һәм ак кыр үзенчәлекләрен ачык күрсәтәләр.Кызыл тартма контрастны көчәйтүче зурлауны күрсәтә.Игътибар итегез, барлык фигуралардагы магнит схемаларының диаметрлары масштабланырга тиеш түгел һәм күрсәтелгәннән якынча 100 тапкыр зуррак.
Магнит капиллярның өске ягына сулга һәм уңга хәрәкәт иткәндә, MP сызыгы почмагы магнит белән тигезләнү өчен үзгәрә (6 нчы рәсемне кара), шулай итеп магнит кыры сызыкларын аера.MP3-5 өчен, аккорд бусага почмагына җиткәч, кисәкчәләр капиллярның өске өслегенә тартыла.Бу еш кына депутатларның магнит кыры иң көчле булган зур төркемнәргә туплануына китерә (өстәмә видео S3: MP5 карагыз).Бу шулай ук ​​капиллярның ахырына якынлашканда ачык күренә, бу депутатның сыек-һава интерфейсында туплануына һәм туплануына китерә.MP3-5 кисәкчәләрен аеру авыррак булган MP6 кисәкчәләре магнит капилляр буйлап хәрәкәт иткәндә тартылмады, ләкин MP сызыклары аерылды, кисәкчәләрне истә калдырды (өстәмә видео S4: MP6 карагыз).Кайбер очракларда, кулланылган магнит кыры магнитны сүрәтләү мәйданыннан ераклыкка күчереп кимегәндә, калган депутатлар әкренләп трубаның аскы өслегенә төштеләр, сызыкта калдылар (өстәмә видео S5: MP3 карагыз) .
Магнит капиллярның уң ягына күчкәндә, MP сызыгы почмагы үзгәрә.а) MP3, б) MP4, в) MP5 һәм г) MP6.Кызыл тартма контрастны көчәйтүче зурлауны күрсәтә.Зинһар, онытмагыз, өстәмә видеолар мәгълүмати максатларда, чөнки алар мөһим кисәкчәләр структурасын һәм бу статик сурәтләрдә күренеп булмый торган динамик мәгълүматны ачалар.
Безнең сынаулар күрсәткәнчә, магнитны трахея буйлап әкрен-әкрен хәрәкәт итү MF-ны виводагы катлаулы хәрәкәт контекстында күз алдына китерә.Виво тестлары үткәрелмәде, чөнки полистирол бусы (MP1 һәм MP2) капиллярда күренми иде.Калган дүрт МФның һәрберсе вивода сынадылар, магнитның озын күчәре трахея өстендә вертикальгә 30 ° почмакта урнашкан (2б һәм 3а рәсемнәрен карагыз), чөнки бу озын MF чылбырларына китерде һәм нәтиҗәлерәк иде. магнитка караганда..конфигурация туктатылды.MP3, MP4 һәм MP6 бернинди тере хайваннар трахеясында табылмады.Кешеләрне кеше үтергәннән соң, тычканнарның сулыш юлларын күз алдына китергәндә, шприц насосы ярдәмендә өстәмә күләм өстәлгәндә дә кисәкчәләр күренми кала.MP5 иң югары тимер оксиды булган һәм бердәнбер күренгән кисәкчәләр булган, шуңа күрә ул MP тәртибен бәяләү һәм характеристика өчен кулланылган.
МФ кертү вакытында магнитны трахея өстенә кую күпләргә китерде, ләкин барысы да түгел, MFлар күренеш өлкәсендә тупланганнар.Кисәкчәләрнең трахеаль керүе кешелекле эйтанлаштырылган хайваннарда иң яхшы күзәтелә.Рәсем 7 һәм өстәмә видео S6: MP5 тиз магнит тотуны һәм вентраль трахея өслегендә кисәкчәләрнең тигезләнүен күрсәтә, бу депутатларның трахеяның кирәкле урыннарына юнәлтелүен күрсәтә.MF җибәргәннән соң трахея буйлап тагын да еракрак эзләгәндә, кайбер MF каринага якынрак табылды, бу барлык MFларны җыю һәм тоту өчен магнит кырының җитәрлек булмавын күрсәтә, чөнки алар сыеклык белән идарә итү вакытында максималь магнит кыры өлкәсе аша китерелгән.процесс.Ләкин, бала тудырудан соңгы MP концентрацияләре рәсем өлкәсе тирәсендә югарырак иде, бу күпчелек депутатларның кулланылган магнит кыры көче булган һава юлларында калганнарын күрсәтә.
Күптән түгел эйтанланган тычкан трахеясенә MP5 китерелгәннән соң һәм (б) рәсемнәре сурәтләү өлкәсе өстендә урнаштырылган магнит белән.Тасвирланган мәйдан ике кариллагин боҗра арасында урнашкан.Депутат китерелгәнче һава юлларында ниндидер сыеклык бар.Кызыл тартма контрастны көчәйтүче зурлауны күрсәтә.Бу рәсемнәр S6: MP5 өстәмә видео күрсәтелгән видеодан алынган.
Магнитны трахея буйлап вивога күчерү, капиллярларда күзәтелгән охшаш, һава юлындагы MP чылбырының почмагын үзгәртүгә китерде (карагыз рәсем 8 һәм өстәмә видео S7: MP5).Ләкин, безнең тикшерүдә, депутатларны капиллярлар кебек тере сулыш юллары өстенә алып булмый.Кайбер очракларда, магнит сулга һәм уңга хәрәкәт иткәндә, MP чылбыры озынайта.Кызык, без шулай ук ​​кисәкчәләр чылбыры сыеклыкның өслек катламының тирәнлеген үзгәртә, магнит трахея буйлап озынлыкка күчерелгәндә, һәм магнит турыдан-туры өскә күчкәндә һәм кисәкчәләр чылбыры вертикаль позициягә әйләнгәндә киңәя. Өстәмә видео S7).: MP5 0:09, астагы уңда).Магнит трахеяның өске ягына күчерелгәндә характеристик хәрәкәт формасы үзгәрде (ягъни трахея озынлыгы түгел, ә хайванның сул яисә уң ягына).Кисәкчәләр хәрәкәт вакытында һаман ачык күренәләр иде, ләкин магнит трахеядан алынгач, кисәкчәләрнең кыллары очлары күренде (өстәмә видео S8: MP5, 0:08 башлап).Бу пыяла капиллярында кулланылган магнит кыры тәэсирендә магнит кырының күзәтелгән тәртибе белән килешә.
Тере наркозланган тычкан трахеясында MP5 күрсәтүче рәсемнәр үрнәге.а) Магнит трахеяның өстендә һәм сул ягында сурәтләр алу өчен кулланыла, аннары (б) магнитны уңга күчергәннән соң.Кызыл тартма контрастны көчәйтүче зурлауны күрсәтә.Бу рәсемнәр S7′s өстәмә видео: MP5 күрсәтелгән видеодан.
Ике багана төньяк-көньяк юнәлештә трахея өстендә һәм астыннан көйләнгәндә (ягъни, җәлеп итү; 3б рәсем), депутат аккордлары озынрак күренде һәм трахеяның диварында, дорсаль өслегендә түгел. трахея (Кушымтаны кара).Видео S9: MP5).Ләкин, бер мәйдандагы кисәкчәләрнең югары концентрацияләре (ягъни трахеяның дорсаль өслеге), ике магнит җайланмасы ярдәмендә сыеклык кулланганнан соң табылмады, гадәттә бер магнит җайланмасы белән була.Аннары, бер магнит каршы полюсларны кире кайтару өчен конфигурацияләнгәндә, рәсем өлкәсендә күренгән кисәкчәләр саны китерелгәннән соң артмады.Ике магнит конфигурациясен көйләү авыр магнит кыры көче аркасында магнитны җәлеп итә яки этәрә.Аннары көйләү һава юлларына параллель бер магнитка үзгәртелде, ләкин һава юллары аша 90 градус почмакта үтте, шулай итеп көч сызыклары трахеаль стенаны ортогональ рәвештә кичтеләр (3d рәсем), бу кисәкчәләр агрегатының мөмкинлеген билгеләргә юнәлтелгән. ян дивар.күзәтелергә тиеш.Ләкин, бу конфигурациядә, MF туплау хәрәкәте яки магнит хәрәкәте юк иде.Бу нәтиҗәләргә нигезләнеп, ген йөртүчеләрнең виво тикшеренүләре өчен бер магнит һәм 30 градус юнәлешле конфигурация сайланды (3а рәсем).
Кеше корбаннары булганнан соң, хайван берничә тапкыр сурәтләнгәндә, комачаулаган тукымалар хәрәкәтенең булмавы, нечкә, кыска кисәкчәләр сызыкларын ачык милләтара кырда күреп була, магнитның тәрҗемә хәрәкәте нигезендә «селкенеп» була.MP6 кисәкчәләренең булуын һәм хәрәкәтен ачык күрегез.
LV-LacZ титеры 1,8 x 108 IU / мл булган, һәм 1: 1не CombiMag MP (MP6) белән кушканнан соң, хайваннарга 50 µл трахеаль доза 9 x 107 IU / мл LV машинасы (ягъни 4.5) x 106 TU / тычкан).).).Бу тикшеренүләрдә, эш вакытында магнитны күчерү урынына, без магнитны бер позициядә урнаштырдык, LV трансдуктивлыгы (а) магнит кыры булмаганда вектор җибәрү белән чагыштырганда яхшыра аламы, ә б) һава юлы мөмкин булса. игътибарлы бул.Күзәнәкләр югары сулыш юлларының магнит максатлы өлкәләрендә күчерелә.
Магнитлар булу һәм CombiMag куллану LV векторлары белән берлектә, безнең стандарт LV вектор тапшыру протоколы кебек, хайваннар сәламәтлегенә начар йогынты ясамады.Механик пертурбациягә дучар булган трахеаль өлкәнең фронталь рәсемнәре (өстәмә рәсем 1) LV-MP белән эшкәртелгән төркемнең магнит булганда трансдуктив дәрәҗәсенең зуррак булуын күрсәтте (9а рәсем).Контроль төркемдә аз күләмдә зәңгәр LacZ буяу булган (9б рәсем).X-Гал-буялган нормальләштерелгән төбәкләрнең саны күрсәткәнчә, LV-MP магнит кыры булганда якынча 6 тапкыр яхшыруга китергән (9-нчы рәсем).
LV-MP (a) белән магнит кыры һәм б) магнит булмаганда трахеаль транскодукцияне күрсәтүче композицион рәсемнәр үрнәге.в) магнит кулланып трахеяда LacZ транскодукциясенең нормальләштерелгән өлкәсендә статистик яктан яхшырту (* p = 0.029, t-test, n = 3 төркемгә, уртача ± стандарт хата).
Нейтраль тиз кызыл төсле бүлекләр (өстәмә рәсемдә күрсәтелгән мисал) LacZ-буялган күзәнәкләрнең бер үк үрнәктә һәм алдан хәбәр ителгән урында булганын күрсәттеләр.
Airава юллары ген терапиясендә төп проблема - кызыклы өлкәләрдә йөртүче кисәкчәләрен төгәл локализацияләү һәм һава агымы һәм актив былжыр чистарту булганда күчмә үпкәдә югары трансдуктив эффективлыкка ирешү.Кистик фиброзда сулыш авыруларын дәвалау өчен эшләнгән LV йөртүчеләр өчен үткәргеч һава юлларында йөртүче кисәкчәләренең яшәү вакытын арттыру әлегә ирешеп булмый торган максат булып тора.Кастеллани һ.б. күрсәткәнчә, транскодукцияне көчәйтү өчен магнит кырларын куллану электропорация кебек ген тапшыру ысулларына караганда өстенлеккә ия, чөнки ул гадилекне, экономиканы, локальләштерелгән тапшыруны, эффективлыкны арттыру һәм инкубация вакытын кыскартырга мөмкин.һәм, мөгаен, транспортның түбән дозасы10.Ләкин, тышкы магнит көче тәэсирендә һава юлларында магнит кисәкчәләренең виво чүпләнеше һәм үз-үзен тотышы беркайчан да тасвирланмаган, һәм чынлыкта бу ысулның тере һава юлларында ген экспрессия дәрәҗәсен күтәрү сәләте вивода күрсәтелмәгән.
PCXI синхротронындагы витро экспериментларыбыз күрсәткәнчә, без тикшергән барлык кисәкчәләр, MP полистиролыннан кала, без кулланган сурәтләү көйләүләрендә күренде.Магнит кыры булганда, магнит кырлары сызыклар ясыйлар, аларның озынлыгы кисәкчәләр төре һәм магнит кырының көче белән бәйле (ягъни магнитның якынлыгы һәм хәрәкәте).10-нчы рәсемдә күрсәтелгәнчә, без күзәткән сызыклар барлыкка килә, һәрбер кисәкчәләр магнитлаша һәм үз җирле магнит кырын җибәрә.Бу аерым кырлар бүтән охшаш кисәкчәләрнең туплануы һәм группа хәрәкәтләре белән тоташуына китерәләр, җирле көчләрнең җирле тарту көче һәм бүтән кисәкчәләрнең тартылуы.
Диаграмма (а, б) сыеклык белән тутырылган капиллярлар эчендә барлыкка килгән кисәкчәләр чылбырын һәм (в, г) һава белән тутырылган трахеяны күрсәтә.Игътибар итегез, капиллярлар һәм трахеялар масштабка тартылмыйлар.Панельдә (а) шулай ук ​​чылбырларда урнаштырылган Fe3O4 кисәкчәләре булган MF тасвирламасы бар.
Магнит капилляр өстендә хәрәкәтләнгәч, кисәкчәләр сызыгы почмагы MP3-5 өчен Fe3O4 булган критик бусагага җитте, аннан соң кисәкчәләр сызыгы элеккеге хәлендә калмады, өслек буенча яңа позициягә күчте.магнит.Бу эффект, мөгаен, булырга мөмкин, чөнки пыяла капиллярның өслеге бу хәрәкәтне рөхсәт итәрлек дәрәҗәдә шома.Кызык, MP6 (CombiMag) үзен шулай тотмады, мөгаен, кисәкчәләр кечерәк булганга, башка каплау яки өслек корылмасы булганга, яисә йөртүче ташучы сыеклык аларның хәрәкәт итү сәләтенә тәэсир иткән.CombiMag кисәкчәләре образындагы контраст шулай ук ​​зәгыйфь, сыеклык һәм кисәкчәләр бер үк тыгызлыкта булырга мөмкин, шуңа күрә бер-берсенә җиңел хәрәкәт итә алмыйлар.Магнит бик тиз хәрәкәтләнсә, кисәкчәләр дә ябышырга мөмкин, бу магнит кыры көченең сыеклыктагы кисәкчәләр арасындагы сүрелүне һәрвакыт җиңә алмавын күрсәтә, магнит кыры көче һәм магнит белән максат өлкәсе арасы ерак булырга тиеш түгеллеген күрсәтә. сюрприз.мөһим.Бу нәтиҗәләр шулай ук ​​шуны күрсәтә: магнитлар максатлы мәйдан аша агып торган күп микропартикларны кулга алсалар да, CombiMag кисәкчәләрен трахея өслегенә күчерү мөмкин түгел.Шулай итеп, без vivo LV MF тикшеренүләре статик магнит кырларын һава юлының аерым өлкәләрен физик яктан максат итеп куярга тиеш дигән нәтиҗәгә килдек.
Кисәкчәләр организмга китерелгәннән соң, организмның катлаулы хәрәкәт тукымасы контекстында ачыклау авыр, ләкин аларны ачыклау мөмкинлеге магнитны горизонталь трахея аша күчереп, MP кылларын "селкетү" өчен яхшырды.Реаль вакыттагы сурәтләү мөмкин булса да, хайван кеше үтерелгәннән соң кисәкчәләр хәрәкәтен ачыклау җиңелрәк.Депутат концентрацияләре, гадәттә, бу урында магнит сурәтләү өлкәсе өстендә булганда иң югары иде, гәрчә кайбер кисәкчәләр гадәттә трахеядан табылды.Витро тикшеренүләреннән аермалы буларак, кисәкчәләрне магнит хәрәкәте белән трахеяга төшереп булмый.Бу ачыш трахея өслеген каплаган былжырның гадәттә сулыш алган кисәкчәләрне эшкәртүенә, былжырга тозакка эләгүенә һәм соңыннан аларны муко-силяр чистарту механизмы белән чистартуга туры килә.
Без фаразладык, трахеяның өстендә һәм астындагы магнитларны тарту өчен (3б рәсем) бер магнит кыры түгел, ә бердәм магнит кыры барлыкка килергә мөмкин, потенциаль кисәкчәләрнең бердәм таралуына китерергә мөмкин..Ләкин, безнең башлангыч тикшерү бу гипотезаны раслаучы ачык дәлилләр тапмады.Нәкъ шулай ук, пар магнитны кире кайтару (3с рәсем) рәсем өлкәсендә кисәкчәләрнең урнашуына китермәде.Бу ике ачыш шуны күрсәтә: ике магнитлы көйләү MP күрсәткән җирле контрольне сизелерлек яхшыртмый, һәм килеп чыккан көчле магнит көчләрен көйләү авыр, бу ысулны практик кулланмый.Нәкъ шулай ук, магнитны трахея өстендә һәм юнәлештә юнәлтү (рәсем 3d) шулай ук ​​имидж өлкәсендә калган кисәкчәләр санын арттырмады.Бу альтернатив конфигурацияләрнең кайберләре уңышлы булмаска мөмкин, чөнки алар чүпләү зонасында магнит кыры көченең кимүенә китерәләр.Шулай итеп, 30 градуслы бер магнит конфигурациясе (3а рәсем) виво сынау ысулында иң гади һәм эффектив санала.
LV-MP тикшеренүләре күрсәткәнчә, LV векторлары CombiMag белән кушылгач һәм магнит кыры булганда физик яктан бозылганнан соң китерелгәндә, контроль белән чагыштырганда трахеяда транскодукция дәрәҗәсе сизелерлек арткан.Синхротрон сурәтләү тикшеренүләренә һәм LacZ нәтиҗәләренә нигезләнеп, магнит кыры LVны трахеяда саклый һәм үпкәгә тирән үтеп кергән вектор кисәкчәләре санын киметә алган кебек тоелды.Мондый максатчан камилләштерү югары эффективлыкка китерергә мөмкин, шул ук вакытта китерелгән титерларны, максатсыз трансдуктивлыкны, ялкынсыну һәм иммун йогынтысын, ген тапшыру чыгымнарын киметү.Иң мөһиме, җитештерүче сүзләре буенча, CombiMag башка ген тапшыру ысуллары белән берлектә кулланылырга мөмкин, шул исәптән башка вируслы векторлар (AAV кебек) һәм нуклеин кислоталары.